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血清储存以及解冻注意事项

需要长期保存的血清必须储存于-20℃ 至- 70℃低温冰箱中,4℃冰箱中保存时间切勿超过一个月。

由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱,必须预留定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。


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【▲反面案例】



 瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:

1、-20℃ 至 -70℃ 血清低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天;

2、然后移入室温或者可以置于37℃水浴中,不断摇动待全部溶解后再分装。

注意:

1、在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与血清成分均一,减少沉淀的发生;

2、切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而出现沉淀;

3、若一次无法用完一瓶,无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。


1)血清化冻为什么是浑浊的?

血清制备过程中会保留部分纤维蛋白原,化冻过程中纤维蛋白原可转化为纤维蛋白,使血清中出现浑浊,絮状物。这种情况不影响血清的功效。

血清化冻过程中,在37℃水浴中放置时间过长,也会导致沉淀产生,沉淀物包含磷酸钙结晶。沉淀物也不影响血清功效。

去除方法:

可以将血清分装至无菌离心管内,以400g 稍微离心,将上清液加入培养基内一起过滤。也可直接过滤血清以去除这些絮状物。

2)血清热灭活(除非必须,一般不建议作此热处理)

血清为何要灭活?

血清热灭活是将血清置于56℃水浴至完全解冻。可灭活其中补体系统中具有蛋白酶活性的成分。补体是免疫系统的成分。对于那些培养困难的细胞、用于病毒检测的细胞、用于细胞毒性检测很重要,可避免补体带来的不利影响。单热灭活也破坏血清中的生长因子,所以除非必需,血清才灭活处理。

启动的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究、培养ES 细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清

血清灭活的正确方法

(1) 按照前面的介绍正确化冻;

(2) 水浴预热56℃。水量要足够,水深要超过瓶中血清的高度;

(3) 轻轻摇动已解冻的血清,置于水浴中,水位可能会下降;

(4) 待水温重新到56℃时,再计时30分钟;

(5) 从水浴中拿出血清,待冷却。-20/-70℃存放。


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